時(shí)間:2014-02-21 來(lái)源:武漢網(wǎng)whw.cc 作者:whw.cc 我要糾錯(cuò)
細(xì)胞裂解的方式包括化學(xué)裂解法、酶裂解法和機(jī)械裂解法;瘜W(xué)裂解法和酶裂解法通常是比擬平和的方法,通常不會(huì)使良多的dna斷裂。這兩種辦法(包含sds
和溶菌酶處置等)時(shí)提取以及純化dna常用的方式。機(jī)械裂解能夠均一的裂解細(xì)胞,同化學(xué)裂解比擬,機(jī)械處理存在更高更強(qiáng)的裂解效力跟更低的抉擇性。機(jī)械處置能夠更激烈的跟全面的裂解細(xì)胞,但會(huì)造成dna
的斷裂。
一、機(jī)械裂解法主要有以下兩中:
1、熱休克法(thermal
shock),既重復(fù)凍溶法,是一種常用的機(jī)械裂解方法,通常由冷凍和解凍兩局部組成(freezing
and
thawing)。原理:因?yàn)榧?xì)胞內(nèi)冰粒的構(gòu)成和殘余細(xì)胞液的鹽濃度增高引起溶脹,使細(xì)胞構(gòu)造粉碎。冷凍通常在液氮或-20°c冰長(zhǎng)進(jìn)行,解凍可以在37、50、65
或100℃水浴中進(jìn)行。熱休克比化學(xué)裂解更加平和,然而很有效,有材料表明用熱休克和溶菌酶與sds的方法取得了90%的細(xì)胞裂解率。
2、超聲波處理(ultrasonication)既應(yīng)用超聲加熱的辦法,把細(xì)胞粉碎。但這種處理睬導(dǎo)致dna
的斷裂,所以加熱不宜過(guò)激烈,要設(shè)定好超聲時(shí)光和空隙時(shí)間,個(gè)別超聲時(shí)間不超過(guò)5秒,空隙時(shí)光最好大于超聲時(shí)間,這些都有利于維護(hù)酶的活性。bead-beating
也是常用的機(jī)械處理方法,有報(bào)道指出bead-beating
比熱休克和化學(xué)裂解的細(xì)胞裂解效果更好固然dna產(chǎn)量較高,但通常得到的dna片斷較小。
二、
恒溫水浴鍋廣泛應(yīng)用于干燥,濃縮,蒸餾,浸漬化學(xué)試劑,浸漬藥品和生物制劑,也可用于水浴恒溫加熱和其他溫度試驗(yàn);瘜W(xué)裂解和酶裂解法(在提核酸時(shí)結(jié)合應(yīng)用)
重要是裂解液處理法,細(xì)。超聲波細(xì)胞破碎儀是在液體中產(chǎn)生空化效應(yīng)的多功能,多用途的儀器,性能可靠,價(jià)格實(shí)惠。胞裂解液的重要目標(biāo)有以下多少種:(1)應(yīng)用去污劑損壞脂質(zhì)雙分子層,決裂細(xì)胞;(2)溶解蛋。標(biāo)準(zhǔn)油槽用戶(hù)包括軍用和民用重量級(jí)計(jì)量部門(mén),出口很多國(guó)家。白;(3)蛋白變性使其穩(wěn)固;(4)克制蛋白酶活性。
主要依據(jù)不同的目的,裂解液的組成有所不同,主要有提取核酸和蛋白兩中。在提取rna或dna時(shí),咱們主要是要充足裂解細(xì)胞,得到更多的核酸;假如咱們的目標(biāo)是蛋白,那要根據(jù)蛋白的地位、特征等因素斟酌裂解液,在提取蛋白后,再依據(jù)試驗(yàn)須要復(fù)性蛋白等。
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